Panaliti Walanda ngagabungkeun CRISPR sareng bioluminescence dina tés ékspérimén pikeunkasakit tepa

Protéin nokturnal anu nembé dikembangkeun tiasa nyepetkeun sareng nyederhanakeun diagnosis panyakit virus, numutkeun panaliti di Walanda.
Ulikan maranéhanana, diterbitkeun Rebo di ACS Publications, ngajelaskeun hiji sénsitip, metoda hiji-hambalan pikeun gancang analisa asam nukléat viral jeung penampilan maranéhanana ngagunakeun glowing protéin biru atawa héjo caang.
Idéntifikasi patogén ku ngadeteksi sidik asam nukléatna mangrupikeun strategi konci dina diagnostik klinis, panilitian biomedis, sareng ngawaskeun kaamanan pangan sareng lingkungan.Tés réaksi ranté polimérase kuantitatif (PCR) kuantitatif sensitip pisan, tapi meryogikeun persiapan sampel anu canggih atanapi interpretasi hasil, sahingga henteu praktis pikeun sababaraha setélan kasehatan atanapi setélan terbatas sumber daya.
Grup ti Walanda ieu hasil tina kolaborasi antara élmuwan ti universitas jeung rumah sakit pikeun ngembangkeun hiji gancang, portabel tur gampang ngagunakeun métode diagnostik asam nukléat nu bisa dilarapkeun dina rupa-rupa setélan.
Aranjeunna diideuan ku kedip-kedip kunang-kunang, glow kunang-kunang, sareng béntang-béntang leutik fitoplankton akuatik, sadayana didamel ku fenomena anu disebut bioluminescence.Pangaruh glow-in-the-poek ieu disababkeun ku réaksi kimiawi ngalibetkeun protéin luciferase.Élmuwan ngasupkeun protéin luciferase kana sénsor anu ngaluarkeun cahaya pikeun ngagampangkeun observasi nalika mendakan udagan.Sanajan ieu ngajadikeun sensor ieu idéal pikeun deteksi titik-of-perawatan, aranjeunna ayeuna kakurangan sensitipitas tinggi diperlukeun pikeun tés diagnostik klinis.Bari metoda ngedit gén CRISPR bisa nyadiakeun kamampuhan ieu, merlukeun loba léngkah jeung parabot husus tambahan pikeun ngadeteksi sinyal lemah nu bisa hadir dina kompléks, sampel ribut.
Panaliti mendakan cara pikeun ngagabungkeun protéin anu aya hubunganana sareng CRISPR sareng sinyal bioluminescent anu tiasa dideteksi ku kaméra digital anu sederhana.Pikeun mastikeun aya cukup sampel RNA atawa DNA pikeun analisis, panalungtik ngalaksanakeun recombinase polymerase amplification (RPA), téhnik basajan nu beroperasi dina suhu konstan sabudeureun 100 ° F.Aranjeunna ngembangkeun platform anyar anu disebut Luminescent Nucleic Acid Sensor (LUNAS), dimana dua protéin CRISPR/Cas9 khusus pikeun bagian padeukeut anu béda tina génom virus, masing-masing gaduh sempalan luciferase unik napel di luhur.
Nalika génom virus spésifik anu ditalungtik ku panalungtik, dua protéin CRISPR/Cas9 ngabeungkeut kana runtuyan asam nukléat udagan;aranjeunna jadi deukeut, sahingga protéin luciferase gembleng pikeun ngabentuk sarta emit lampu biru ku ayana substrat kimiawi..Pikeun ngitung substrat anu dikonsumsi dina prosés ieu, panalungtik ngagunakeun réaksi kontrol anu ngaluarkeun lampu héjo.Tabung anu robah warna tina héjo ka biru nunjukkeun hasil anu positif.
Para panalungtik nguji platformna ku ngamekarkeun assay RPA-LUNAS, anu ngadeteksiRNA SARS-CoV-2tanpa isolasi RNA tedious, sarta nunjukkeun kinerja diagnostik na on sampel swab nasopharyngeal tinaCOVID 19penderita.RPA-LUNAS suksés ngadeteksi SARS-CoV-2 dina 20 menit dina conto kalayan viral load RNA dugi ka 200 salinan/μL.
Panaliti yakin yén assayna tiasa gampang sareng efektif ngadeteksi seueur virus anu sanés."RPA-LUNAS pikaresepeun pikeun uji kasakit tepa titik-of-care," aranjeunna nyerat.